1、 实验简介

DNA Pull down实验是用脱硫生物素标记特异性DNA探针，脱硫生物素探针可以和偶联在磁珠上的链霉亲和素亲和结合。提取物与磁珠-DNA探针孵育，作用蛋白质分子可以和DNA探针特异性结合；经过洗涤可以将非特异性结合蛋白质去除；用 Western Blot或质谱对产物进行检测分析。

实验流程图：

2、 DNA pull-down技术应用

DNA pull-down以感兴趣的DNA序列为探针，寻找与该序列结合的蛋白质，最常见的应用是寻找某特定基因启动子区域的转录因子。

a. DNA Pull down WB，用于检测目标DNA序列与某样本中的待测蛋白是否存在相互作用；

b.

DNA Pull down MS，用于筛选目标DNA序列与某样本中的哪些蛋白具有相互作用。

3、 具体服务内容及客户需提供的信息与材料

DNA pull down 检测服务

服务项目

服务内容

结果交付

实验周期

客户提供

DNA pull-down WB

制备DNA探针

探针电泳图

25工作日

1、实验样本2、含有目标DNA序列的质粒模板及测序文件3、待测蛋白抗体4、实验信息表（样本信息、抗体信息、目标DNA和待测蛋白序列）

Western blot检测待测样本中的待测蛋白

Western blot检测图

DNA pull down捕获目标DNA片段及其结合蛋白（2组：实验组、对照组）

RNA pull down实验报告

WB 检测DNA pull down 产物中待测蛋白

Western blot检测图

DNA pull-down MS

制备DNA探针

探针电泳图

40工作日

1、实验样本2、含有目标DNA序列的质粒模板及测序文件3、实验信息表（样本信息、目标DNA序列）

DNA pull down捕获目标DNA片段及其结合蛋白（2组：实验组、对照组）

pull down实验报告

SDS-PAGE评估DNA pull down产物中的蛋白含量和数量

SDS-PAGE银染检测图

LC-MS/MS定性检测pull down产物的蛋白、筛选实验组独有蛋白（潜在互作蛋白）

质谱检索表格、互作蛋白筛选表格、检测报告

针对互作蛋白做生物信息学分析（GO、KEGG pathway、String）

生物信息学分析结果和报告

5工作日

4、 DNA pull down 送样要求

a. 送样量要求

样本类型

DNA pull dow WB建议送样量

DNA pull down MS建议送样量

动物细胞

3*10^7细胞/组

5*10^7细胞/组

动物组织

1g/组

2g/组

植物

5g/组

10g/组

菌体

50ul菌体沉淀/组

100ul菌体沉淀/组

b. 样本保存和运输要求

1） 先放入液氮中速冻，再转移至-80℃冰箱中保存

2） 样本较多或者需要分批检测，需要把样本分装到不同的管子

3） 样本必须干冰运输