实时荧光定量PCR(qPCR)是慢性髓性白血病(CML)中检测BCR::ABL融合mRNA水平的标准方法，可用于评估分子学反应、监测微小残留病变(MRD)水平，并指导后续治疗。数字PCR(dPCR)是近年新兴的能够提供BCR::ABL融合基因序列绝对定量的技术，国外已经将dPCR技术应用于CML患者MRD检测。相较于qPCR，dPCR具有更高的敏感性和准确性。但目前dPCR技术是应用于达到深层分子学反应(DMR，至少达MR4[即BCR::ABLIS≤0.01%])的患者中还是作为监测CML患者分子学反应的常规工具，国外学者的意见尚不统一。虽然dPCR技术监测MRD的准确性高于qPCR技术，但操作技术更为复杂，检测成本和检测费用明显增高。因此，何时应用以及哪些人更适合应用dPCR技术监测MRD水平值得探讨。

基于此，北京大学人民医院江倩教授团队系统性回顾并收集了在北京大学人民医院就诊的356例CML患者的459对外周血标本，比较qPCR与dPCR两种检测方法检测BCR::ABL水平的差异性、相关性以及一致性，以探讨选择使用dPCR方法监测CML患者MRD的最佳时机。

该研究发表于《中华血液学杂志》2023年44卷11期。

1研究方法

本研究为非干预性、横断面研究，收集2021年9月至2023年2月在我院就诊的服用酪氨酸激酶抑制剂(TKI)至少获得完全细胞遗传学反应(CCyR，即Ph+细胞=0)的CML患者采用dPCR以及qPCR检测 BCR::ABL融合基因的结果。

2研究结果01

病例特征

本研究共纳入356例CML患者，共获得459对外周血样本qPCR及dPCR检出的BCR::ABL转录水平结果。根据qPCR结果，包括分子学反应未达MMR 9例10对、MMR(即BCR::ABLIS≤0.1%)20例21对、MR4 46例57对、MR4.5(即BCR::ABLIS≤0.0032%)25例31对和基因转阴256例340对。

02

差异性

基于qPCR检测结果的分子学反应，将356对样本的 BCR::ABL/ABL(％)IS 值分组比较差异性。总体上，两种方法检测的BCR::ABLIS差 异 有 统 计 学 意 义(P＜0.001)。根据qPCR检测结果分层分析：未达MMR组(P＝0.922)、MMR组(P＝0.723)和MR4组(P＝0.099)的BCR::ABLIS差异均无统计学意义，MR4.5组(P＜0.001)和基因转阴组(P＜0.001)两种检测方法的差异具有统计学意义。

03

相关性

基于qPCR检测结果的分子学反应，将117对两种方法均可检出BCR::ABL mRNA的数据分组比较相关性。总体上，两种方法检测的BCR::ABLIS存在中度相关性(r＝0.761，P＜0.001)。根据qPCR检测结果分层分析：未达 MMR组(r＝0.929，P＜0.001)和 MMR组(r＝0.815，P＜0.001)两种方法检测结果存在高度相关性，MR4组仅有低度相关性(r＝0.408，P＜0.001)，MR4.5组无显著相关性(r＝0.176，P＝0.176)

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一致性

将117对两种方法均可检出BCR::ABL mRNA的结果，应用Bland-Altman方法比较dPCR与qPCR结果的一致性。总体上，117对样本的两种方法检测的BCR::ABLIS的差值均值d＝-0.052。根据qPCR检测结果做基于分子学反应的分层分析：未达MMR组d＝0.042，MMR组d＝0.054，MR4组d＝-0.020，MR4.5组d＝-0.219。MR4.5组的差值均值d的绝对值大于其他各组，且P＜0.001，表明该组两种检测方法的一致性较其他组弱。

研究者解析

本研究表明，dPCR与qPCR两种方法检测慢粒患者BCR::ABL mRNA的结果存在差异，且差异主要体现在达到MR4.5和基因转阴的患者中。两种方法检测结果在MR4组仅具有弱相关性，MR4.5组无相关性。MR4.5组两种方法检测结果的一致性也较其他组弱。这些结果表明，CML患者分子学监测选择时，在qPCR分子学反应达到稳定DMR后再选用dPCR方法，可以更精准地评估BCR::ABL mRNA水平，避免带来不必要的经济负担，发挥dPCR方法最大的价值。此外，也建议在进行TKI减量或停药的患者中应用dPCR方法，以提高分子学反应监测的精准度。

参考文献

高汉林,郝玥,陈文敏,等. 数字PCR与实时荧光定量PCR检测慢性髓性白血病患者BCR::ABL mRNA水平的比较性研究[J]. 中华血液学杂志,2023,44(11)：906-910. DOI:10.3760/cma.j.issn.0253-2727.2023.11.004

原文链接：

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撰文 | 高汉林 江倩

审核 | 江倩

江倩

国家中心PI 教授 主任医师 博导

国家血液系统疾病临床医学研究中心

北京大学人民医院

北京大学血液病研究所

高汉林

导师：江倩教授

北京大学人民医院

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