实验原理：

DNA提取的原理为裂解细胞，使细胞中的核酸和大分子物质释放出来，然后用一系列的试剂纯化，最后得到DNA的过程。

实验试剂：

细胞系A549、组织/细胞DNA提取试剂盒（诺唯赞）、无水乙醇等。

实验步骤：

1.实验前细胞准备

根据说明书要求制备3x1066个细胞，1000g离心后，弃上清，加入200uL PBS溶液、10 μLRNase SoLution和20 μL Proteinase K至样品中，用枪吸打，重悬细胞。

2.细胞裂解

加入250μL Buffer GB至细胞重悬液中，涡旋混匀。65摄氏度水浴30分钟，每隔十分钟取出来翻转EP管。

3.过柱纯化

•加入180 μL无水乙醇至消化液中，涡旋混匀。将gDNA CoLumns吸附柱置于2 mL收集管中。将上一步所得混合液转移至吸附柱中，12,000 转离心1 min。

注：若出现堵柱现象，再最高转速离心 3-5 min；若混合液超过 750 μL需分次过柱。

•弃滤液，将吸附柱置于收集管中。加入500 μL Washing Buffer A至吸附柱中。12,000转离心1分钟。

•弃滤液，将吸附柱置于收集管中。加入650 μL Washing Buffer B至吸附柱中。12,000 转离心1分钟。(重复一次）。

•弃滤液，将吸附柱置于收集管中。12,000转空管离心2分钟。

•将吸附柱置于新的1.5 mL离心管。加入30 - 100 μL预热至70oC的ELution Buffer至吸附柱的膜中，静置1分钟，12,000 转离心2分钟。

•弃收集柱，得到DNA溶液。

4.检测

取1μL溶液进行琼脂糖凝胶电泳，在成像系统中成像，检测DNA提取的质量，结果如图，在marker以上有条明显的条件，即为提取的细胞DNA。

注意事项：

1.DNA提取时，EP管和枪头等耗材要先进行高压蒸汽灭菌，去除DNA酶（无酶无菌耗材除外）。

2.实验前，需保证细胞状态活性良好。若细胞死亡，提取的DNA不完整。

3.由于实验过程存在有机试剂，实验操作人员严格穿戴实验服和手套。保障自身安全。